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时间:2019-09-30    点击: 次    来源:网络    作者:佚名

要求作者按范文写作和编排

 

荧光光谱法测定盐酸小檗碱的含量

赵安婷,李庆,王显勇,董南*

(贵州大学 化学与化工学院化学系,贵州 贵阳 550025)

 

  : 利用七元瓜环的荧光增敏作用测定盐酸小檗碱片和复方黄连素片中盐酸小檗碱(C20H18ClNO4)的含量结果表明:在pH为2.0、λex=345.07nm、λem=498.07nm条件下,盐酸小檗碱的浓度 2×10-8 ~ 1×10-5mol/L 具有良好的线性关系, 加样回收率为97 %~103 %,RSD1.5%以内方法适用于盐酸小檗碱含量的测定

关键词: 荧光光谱法; 盐酸小檗; 瓜环; 含量测定

中图分类号:O657. 3  文献标识码:A  文章编号:1008-0457(01)-0-0

Fluorescence spectrophotometric determination

 of Berberine Hydrochloride Content

ZHAO An-ting, LI Qing, WANG Xian-yong, DONG Nan*

(School of Chemistry and Chemical Engineering, Guizhou University, Guiyang Guizhou 550025, China)

Abstract:  The berberine hydrochloride content was measured by use of cucurbit (n) urils (n=7) sensitizing effect of the fluorescence. Under the conditions of pH=2.0, λex=345.07nm, λem=498.07nm,the result shows that the berberine hydrochloride has a good linear relationship between 2×10-8mol/L and 1×10-5mol/L, the sample’s rate of recovery is 97% ~ 103 %, RSD <1.5% . The method can be used for quality control of the preparation.

Key words: fluorescence titration; berberine hydrochloride; cucurbit (n) urils (n=7); content measurement

   小檗碱(BER)[1-3]是黄连、黄柏中含量最多的生物碱,现代研究表明其具有杀菌、局部麻醉、抗心律失常,治原发性高血压,抗肿瘤等广泛的药理学作用。盐酸小檗碱的含量测定是衡量黄连质量的重要指标,主要有HPLC法[4]、高效毛细管电泳法[5]、薄层色谱[6]、分光光度法[7]等。因盐酸小檗碱的荧光强度很低,当含量较小时,其含量测定较困难, 而新型笼状的、以苷脲(或苷脲衍生物)为结构单元的大环主体分子瓜环[8-9](Cucurbituril,简写为CB [n] )可以增强盐酸小檗碱的荧光强度[10]。本研究根据七元瓜环的荧光增敏作用测定盐酸小檗碱含量通过对其浓度、pH值、线性范围、稳定性和回收率等因素考察,筛选出最优实验条件,建立了测定盐酸小檗碱含量的新方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

    Cary Eclipse (Varian, America) 荧光光谱仪pH计,CSF-1A超声振荡仪(上海超声波仪器厂),电子分析天平,80-2离心机(上海手术器械厂),台式干燥箱(重庆实验设备厂),容量瓶。盐酸小檗碱(BER, 中国生物药品鉴定所,含量﹥99%),七元、八元瓜环(贵州大学应用化学研究所自制),复方黄连素片(成都森科制药有限公司),盐酸小檗碱片(北京中新制药厂),浓盐酸(分析纯,成都试剂厂),去离子水。

1.2 方法

1.2.1 储备液的制备 称取0.001 9g盐酸小檗碱,用酸液(pH值2)定容后,配制成浓度为1.0×10-3 mol/L的储备液;另称取0.058 1g七元瓜环(Q[7]),同上处理,配制成浓度为2.0×10-4mol/L的储备液。

1.2.2 样品的处理及配制 各取3复方黄连素片和盐酸小檗碱片,每份20片,干燥后,剥去糖衣,称重,研磨成粉末,密封保存。平行称取50mg复方黄连素片两2份,用酸液在水浴中超声溶解后室温定容于250mL容量瓶中,6份溶液避光保存待用。

1.2.3 测定条件  室温测量电压550V激发和发射狭缝宽度均为5nmλex=345.07nmλem=498.07nm

2 结果与分析

2.1 试验条件

2.1.1波长选择  在荧光光谱仪上扫描浓度为1. 0 mmol/L盐酸小檗碱溶液激发光谱和发射光谱。发现其最大激发波长λex=345.07nm最大发射波长λem=498.07nm

2.2.2稳定性试验 1.2.1样品每隔5min测量其荧光发现放置时间为15min~100min,体系的荧光强度保持稳定

2.2.3pH值选择 Q[7]BER形成的包结体系包结比为2:1物质的量之比为BER : (Q[7])=1 : 3量取1.2.1中的溶液,用不同浓度的盐酸定容于10mL容量瓶中,放置15min后,测定其荧光强度,在体系pH≥2.0后,荧光强度增加到最大并保持稳定故选pH=2.0

2.2 线性关系考察  

    1.2.1BER标准溶液,配制成7组浓度系列溶液(2.0×10-86.0×10-82.0×10-75.0×10-72.0×10-65.0×10-61.0×10-5mol/L)3物质的量添加七元瓜环后,用酸液定容在选定的仪器操作条件下对标准溶液进行测定并绘制标准曲线, 得出小檗碱浓度在2.0×10-8~1.0×10-5mol/L范围内与荧光强度有良好的线性关系,回归方程为F=4.115 3+3.752 6×107CR=0.996 9

2.3 精密度试验 

    分别取1.2.2中的溶液2mL,加2mL Q[7]酸液定容于25mL容量瓶中,平行测量5次荧光强度出两样品的盐酸小檗碱浓度(1)相差都较小,RSD < 0.6%表明精密度良好可以用于BER的含量测定。

1 盐酸小檗碱精密度试验?

Tab.1 Results of precision test

样品

编号

F(a,u)

浓度(mol/L)

平均浓度(mol/L)

RSD(%)

 

 

复方黄连素片

 

1

200.461

5.23×10-6

 

 

5.20×10-6

 

 

0.54

2

200.555

5.23×10-6

3

199.361

5.20×10-6

4

198.345

5.18×10-6

5

198.056

5.27×10-6

 

 

盐酸小檗碱片

1

166.282

4.32×10-6

 

 

4.33×10-6

 

 

0.33

2

166.951

4.34×10-6

3

166.343

4.32×10-6

4

166.713

4.33×10-6

5

166.148

4.32×10-6

2.4 盐酸小檗碱含量测定 

    复方黄连素片和盐酸小檗碱片经处理后(1.2.2),用酸溶解,配制成相应的测溶液,测定荧光强度,计算盐酸小檗碱的含量复方黄连素片的盐酸小檗碱的含量(30.04mg)与标示量(30mg)接近,RSD0.13%,体系较稳定;盐酸小檗碱片的盐酸小檗碱的含量(99.65mg)与标示量(100mg)接近,RSD-0.35%(2)。结果表明,该方法对的盐酸小檗碱含量的测定结果良好,方法可行。 

2 盐酸小檗碱含量测定

Tab.2 Results of sample determination

样品

编号

F(a,u)

浓度(mol/L)

BER/片(mg)

平均(mg)

标示量(mg)

RSD (%)

 

复方黄连素片

 

1

195.149

5.10×10-6

29.70

 

29.67

 

30.00

 

-1.10

2

192.919

5.03×10-6

29.35

3

196.887

5.14×10-6

29.97

 

盐酸小檗碱片

1

185.101

4.82×10-6

98.67

 

99.65

 

100.0

 

-0.35

2

187.824

4.90×10-6

100.14

3

187.848

4.90×10-6

100.15

2.5 重现性试验

    32mL 1.2.2溶液加入2mLQ[7]储备液,酸液定容后,测定荧光强度;另称取10mg盐酸小檗碱片同上处理,代入标准曲线方程计算出两样品中的盐酸小檗碱的浓度相差较小,RSD都小于1.0%说明测定法重现性良好(3) 

3 重复性测定试验结果

Tab.3 Repeated measurement results

样品

编号

F(a,u)

浓度(mol/L)

平均值(mol/L)

RSD (%)

 

复方黄连素片

 

1

202.324

5.28×10-6

 

5.24×10-6

 

0.69

2

200.465

5.23×10-6

3

199.459

5.21×10-6

 

盐酸小檗碱片

1

198.505

5.18×10-6

 

5.14×10-6

 

0.78

2

195.603

5.10×10-6

3

196.876

5.14×10-6

 

 2.6 方法回收率 

    分别配制高浓度(1×10-5 mol/L)和中浓度(4×10-6 mol/L)的盐酸小檗碱标准溶液各3测定荧光强度,代入对应标准曲线求出浓度,获得的回收率都较好,尤其是高浓度的盐酸小檗碱回收率更接近100%RSD<0.4%(4)

4方法回收率试验结果

Tab.4 the recovery results

浓度(mol·L-1)

F(a,u)

对应浓度(mol/L)

回收率(%)

平均值(%)

RSD (%)

 

4.00×10-6

172.673

4.49×10-6

112.32

 

111.84

 

0.37

171.677

4.46×10-6

111.64

171.558

4.46×10-6

111.56

 

1.00×10-5

370.758

0.99×10-5

98.71

 

98.84

 

0.29

370.491

0.99×10-5

98.64

372.451

0.99×10-5

99.17

 

 

 

 

 

 

 

 

2.7 加样回收率 

称取25mg复方黄连素片,3.2mg BER,加入到250mL容量瓶中用酸溶解定容;另5mg盐酸小檗碱片样品再准确称取2.9mg BER,同上处理测定荧光计算(4),得出两样品的加样回收率为97%~103%RSD1.5%以内方法的加样回收率良好。

 

 

 

 

5 加样回收率试验结果

Tab.5 Recoveries of sample

样品

编号

F(a,u)

浓度(mol/L)

质量(mg)

回收率(%)

平均值(%)

RSD (%)

复方黄连素片

 

1

201.579

5.28×10-6

6.34

101.29

 

101.07

 

0.66

2

200.770

5.25×10-6

6.31

100.32

3

201.999

5.29×10-6

6.35

101.61

盐酸小檗碱片

1

189.354

4.94×10-6

5.93

104.49

 

103.27

 

1.33

2

187.113

4.88×10-6

5.86

102.01

3

188.288

4.91×10-6

5.90

103.31

3 结论

采用七元瓜环荧光增敏作用测定盐酸小檗碱含量,该方法在其浓度为2.0×10-8mol/L~1.0×10-5mol/L范围内有良好的线性关系,传统的荧光光度法相比具有灵敏度高、选择性好、快速、简便的优点可作为药品试剂中微量痕量盐酸小檗碱含量测定的新方法。

:

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